伯樂（Bio-Rad）S1000是一款經(jīng)典的96孔梯度PCR儀，性能穩(wěn)定可靠。其耗材和試劑的選擇與其他標(biāo)準(zhǔn)PCR儀類似，但有一些品牌有的推薦和注意事項(xiàng)。以下是使用伯樂S1000梯度PCR儀所需的耗材和試劑清單及選擇指南：

一、伯樂S1000梯度PCR儀核心耗材

1、PCR板或管

（1）類型：必須使用0.2 ml規(guī)格的PCR板或單管/聯(lián)管。

（2）與儀器的匹配性：

推薦：伯樂原裝或認(rèn)證的耗材（如硬質(zhì)96孔PCR板），以確保與熱蓋壓力和導(dǎo)熱塊接觸，獲得最準(zhǔn)確的溫度控制。

通用：大多數(shù)市售的標(biāo)準(zhǔn)96孔PCR板（平蓋或凸蓋）和0.2 ml單管/8聯(lián)管均可使用。

（3）材質(zhì)：推薦使用聚丙烯材質(zhì)，導(dǎo)熱性好，耐高溫。

封蓋：

（4）熱蓋：如果使用PCR儀的熱蓋功能，必須使用平蓋的PCR板或管。

封板膜：如果不使用熱蓋，或樣本有蒸發(fā)風(fēng)險(xiǎn)（如長期循環(huán)），需使用透明的光學(xué)封板膜進(jìn)行密封。確保封板膜能耐受高溫（通常可至120°C以上）。

2、封板膜（可選）

如上所述，用于密封PCR板。選擇粘性好、密封性強(qiáng)、無PCR抑制劑的光學(xué)封板膜。

二、伯樂S1000梯度PCR儀核心試劑

1、PCR預(yù)混液

（1）常用和方便的選擇。通常包含：

（2）熱啟動(dòng)DNA聚合酶：如Taq酶、高保真酶等。

（3）dNTPs：四種脫氧核苷酸混合物。

（4）反應(yīng)緩沖液：含Mg2?（鎂離子濃度可能可調(diào)）。

（5）優(yōu)化劑和穩(wěn)定劑。

2、品牌：可選擇伯樂自家的SsoAdvanced系列、iTaq系列等預(yù)混液，也可以使用其他品牌（如NEB、Takara、Thermo Fisher等）的預(yù)混液，需確保其反應(yīng)體系與程序兼容。

3、自配PCR反應(yīng)體系

如果您習(xí)慣于自行配制，需要準(zhǔn)備以下獨(dú)立組分：

（1）PCR緩沖液（10X或5X）：提供合適的pH和鹽離子環(huán)境。

（2）MgCl溶液：鎂離子濃度對PCR特異性影響重大，梯度PCR儀特別適合優(yōu)化此條件。

（3）dNTP Mix。

（4）正向引物和反向引物。

（5）DNA模板。

（6）DNA聚合酶。

（7）無菌去離子水。

4、陽性對照與陰性對照

（1）陽性對照：含有已知目標(biāo)序列的DNA模板，用于驗(yàn)證整個(gè)反應(yīng)體系正常。

（2）陰性對照（無模板對照，NTC）：用等體積水替代DNA模板，用于檢測試劑或環(huán)境是否存在污染。

三、伯樂S1000梯度PCR儀輔助耗材與試劑

1、移液器及無菌吸頭：用于精確分裝試劑，需保證無核酸酶污染。

2、離心機(jī)：用于在將板/管放入PCR儀前，離心混勻并收集管壁液滴。

3、冰盒：在配制反應(yīng)體系時(shí)保持試劑低溫，防止非特異性擴(kuò)增。

4、無核酸酶水：用于稀釋或調(diào)整反應(yīng)體積。

5、樣品板/管架：方便操作。

四、伯樂S1000梯度PCR儀選擇建議總結(jié)

1、追求性能和兼容性：選擇伯樂原裝的0.2 ml硬質(zhì)PCR板和其推薦的預(yù)混液。

2、常規(guī)使用，控制成本：選擇市面上可靠品牌的平蓋0.2 ml PCR板和性能穩(wěn)定的預(yù)混液（需經(jīng)過驗(yàn)證）。

3、進(jìn)行梯度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)：

務(wù)必使用成分均一的主混合液。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)，在板上合理安排不同溫度或條件的樣本位置。

最后建議：

閱讀 《伯樂S1000用戶手冊》，其中會(huì)有推薦的耗材型號和詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)設(shè)置指南。

在開始重要的梯度優(yōu)化實(shí)驗(yàn)前，先用已知模板和引物進(jìn)行常規(guī)PCR測試，以確認(rèn)整個(gè)系統(tǒng)（儀器+耗材+試劑）工作正常。