選擇StepOnePlus™實時熒光定量PCR系統(tǒng)時，需要了解以下幾個關(guān)鍵參數(shù)，以確保它能夠滿足您的實驗需求。這些參數(shù)可以分為兩大類：系統(tǒng)硬件性能參數(shù)和實驗應(yīng)用相關(guān)參數(shù)。

一、賽默飛StepOnePLus實時熒光定量PCR系統(tǒng)性能參數(shù)

1、檢測通道和濾光片

（1）關(guān)鍵點：StepOnePlus是四色通道系統(tǒng)。這意味著它可以同時檢測最多四種不同的熒光信號。

（2）檢測方法：如果您使用TaqMan探針（如FAM, VIC）或SYBR Green染料法，需要確認染料/探針的熒光基團是否與儀器的濾光片波長匹配。StepOnePlus的標配通道通常能覆蓋FAM, SYBR Green, VIC/JOE, NED/TAMRA/Cy3, ROX™等常用熒光基團。

（3）多重檢測能力：如果您需要在一個反應(yīng)孔里同時檢測多個靶基因（多重PCR），四通道的限制就很重要。例如，一個通道用于內(nèi)參基因，那么最多還能檢測三個目標基因。

2、通量

（1）關(guān)鍵點：StepOnePlus采用96孔板標準格式。

（2）樣本數(shù)量：您一次實驗最多需要運行多少個樣本？包括標準品、待測樣本、陰性對照等。96孔板除去對照，通常一次運行可處理80-90個樣本。

（3）實驗規(guī)劃：如果您的樣本量經(jīng)常接近或超過96個，可能需要考慮更高通量的儀器（如Applied Biosystems 384孔或更高通量的系統(tǒng)），或者接受分批次運行，這會增加時間和試劑成本。

3、動態(tài)范圍

（1）關(guān)鍵點：指儀器能夠準確定量從低濃度到高濃度模板的范圍，通常用數(shù)量級表示（例如，10個數(shù)量級）。

（2）需要了解：StepOnePlus具有很寬的動態(tài)范圍（通?？蛇_10個數(shù)量級），這對于準確量化拷貝數(shù)差異巨大的樣本（如病毒載量檢測、基因表達高低懸殊的樣本）至關(guān)重要。

4、靈敏度

（1）關(guān)鍵點：指儀器能夠檢測到的低模板拷貝數(shù)。

（2）需要了解：如果您的研究涉及痕量核酸的檢測（如微量病原體、低豐度基因表達、循環(huán)腫瘤DNA等），高靈敏度是首要考慮因素。StepOnePlus的靈敏度很高，通?？梢詸z測到單拷貝的模板。

二、賽默飛StepOnePlus實時熒光定量PCR實驗應(yīng)用相關(guān)參數(shù)

1、溫控系統(tǒng)和升溫速率

（1）關(guān)鍵點：StepOnePlus使用半導(dǎo)體帕爾貼技術(shù)進行溫控。

（2）溫控精度和均一性：這直接影響PCR擴增的效率性和特異性，確保所有反應(yīng)孔的條件一致，結(jié)果可靠。

（3）升溫速率：更快的升溫速率可以縮短實驗周期。StepOnePlus的速率屬于標準水平，適合絕大多數(shù)常規(guī)qPCR實驗。如果您對實驗速度有高要求，可以考慮更快速的機型。

2、軟件功能和分析能力

（1）關(guān)鍵點：配套的StepOne™ Software是操作儀器和分析數(shù)據(jù)的核心。

（2）用戶界面：是否易于上手，進行程序設(shè)置、板面定義和運行監(jiān)控。

（3）數(shù)據(jù)導(dǎo)出：能否方便地將原始數(shù)據(jù)（Ct值等）導(dǎo)出到其他專業(yè)分析軟件（如Excel, GraphPad Prism）進行進一步處理。

3、兼容性

（1）關(guān)鍵點：儀器對耗材和試劑的兼容性。

（2）耗材：是否必須使用原廠的昂貴PCR板/蓋膜，還是兼容其他品牌的低成本耗材（需確認光學(xué)兼容性）。

（3）試劑：系統(tǒng)是開放式的，可以使用任何品牌的qPCR試劑（TaqMan或SYBR Green），這給了您更大的選擇和成本控制空間。

三、總結(jié)選擇建議

StepOnePlus是一款非常成熟、穩(wěn)定且用戶友好的中端qPCR儀。它非常適合以下用戶：

1、進行基因表達分析、病原體檢測、SNP分型等常規(guī)qPCR實驗的學(xué)術(shù)實驗室或臨床檢測實驗室。

2、樣本通量在96孔板范圍內(nèi)。

3、注重實驗結(jié)果的準確性和重復(fù)性。

4、希望平衡儀器性能與長期使用成本。

在選擇前，能結(jié)合您的具體實驗需求，與供應(yīng)商的技術(shù)支持詳細溝通，甚至可以要求進行樣本測試，以最直觀地驗證StepOnePlus是否滿足您的要求。