QuantStudio 1是一個(gè)經(jīng)典的入門級(jí)qPCR儀，使用96孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其所需的耗材和試劑可以分為兩大類：儀器專用耗材和通用試劑。

一、賽默飛QuantStudio1實(shí)時(shí)熒光定量PCR核心耗材

1、反應(yīng)板 / 板子

（1）微孔板： 常用的是標(biāo)準(zhǔn)96孔PCR板。重要的是，板子的材質(zhì)必須是光學(xué)級(jí)的，以確保熒光信號(hào)能被儀器準(zhǔn)確檢測(cè)。

（2）推薦品牌： 當(dāng)然是賽默飛原廠的MicroAmp™ Fast 96孔反應(yīng)板（貨號(hào)例如：4346906），因?yàn)樗c儀器的兼容性和光學(xué)性能都經(jīng)過優(yōu)化。

（3）兼容品牌： 其他有名氣品牌（如 Axygen, Bio-Rad, Eppendorf 等）生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)96孔光學(xué)PCR板通常也可以使用，但建議進(jìn)行驗(yàn)證以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定。

2、光學(xué)蓋膜或蓋板

這是密封反應(yīng)板、防止樣品蒸發(fā)和污染的關(guān)鍵部件。QuantStudio 1系統(tǒng)主要支持兩種方式：

（1）光學(xué)粘合膜： 這是一次性的透明粘性薄膜，直接貼在反應(yīng)板上。

（2）推薦： 賽默飛MicroAmp™ 光學(xué)粘合膜（貨號(hào)：4311971）。這是常用、方便的選擇。

（3）光學(xué)蓋板： 這是一個(gè)可重復(fù)使用的硬質(zhì)透明蓋板。使用時(shí)需要在蓋板和反應(yīng)板之間加一層墊圈以確保密封。

（4）推薦： 賽默飛MicroAmp™ 光學(xué)8聯(lián)管蓋（適用于8聯(lián)管）或相應(yīng)的96孔光學(xué)蓋板?？芍貜?fù)使用，長(zhǎng)期成本可能更低，但需要清洗和小心維護(hù)。

總結(jié)： 最基本的耗材組合是 “96孔光學(xué)PCR板 + 光學(xué)粘合膜"。

二、賽默飛QuantStudo1實(shí)時(shí)熒光定量PCR核心試劑

1、熒光定量PCR預(yù)混液

這是核心試劑，包含了DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等。根據(jù)檢測(cè)方法不同，主要分為兩大類：

（1）染料法（SYBR Green）：

原理： 使用SYBR Green染料，它能非特異性地嵌入所有雙鏈DNA中發(fā)出熒光。

優(yōu)點(diǎn)： 便宜，使用靈活。

缺點(diǎn)： 特異性相對(duì)較低，會(huì)與非特異性產(chǎn)物結(jié)合，需要配合熔解曲線分析來驗(yàn)證結(jié)果。

推薦試劑： 賽默飛 PowerUp™ SYBR™ Green預(yù)混液（貨號(hào)：A25742）或其經(jīng)典的 SYBR™ Select Master Mix。其他品牌的SYBR Green預(yù)混液也廣泛適用。

（2）探針法（TaqMan）：

原理： 使用序列特異性的寡核苷酸探針，探針上帶有熒光報(bào)告基團(tuán)和淬滅基團(tuán)，特異性高。

優(yōu)點(diǎn)： 特異性高，適合多靶標(biāo)檢測(cè)（多重PCR）。

缺點(diǎn)： 成本較高，探針需要單獨(dú)設(shè)計(jì)合成。

推薦試劑： 賽默飛 TaqMan™ Fast Advanced預(yù)混液（貨號(hào)4444557）或其他 TaqMan™ Universal Master Mix。

2、引物和探針

（1）引物： 無論是染料法還是探針法，都需要一對(duì)特異性引物來擴(kuò)增目標(biāo)基因。

（2）探針： 僅用于探針法，需要根據(jù)目標(biāo)序列設(shè)計(jì)并標(biāo)記好熒光基團(tuán)（如FAM, VIC等）。

3、模板DNA/cDNA

您要檢測(cè)的樣品核酸。如果是檢測(cè)RNA，則需要先通過反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后再進(jìn)行qPCR。

三、標(biāo)準(zhǔn)工作流程總結(jié)

1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)： 確定使用染料法還是探針法。

2、配制預(yù)混液： 在無菌環(huán)境下，將預(yù)混液、引物/探針、水混合。

3、分裝： 將預(yù)混液分裝到96孔光學(xué)板或8聯(lián)管中。

4、加入模板： 加入您的DNA/cDNA模板。

5、密封： 貼上光學(xué)粘合膜或蓋上光學(xué)蓋板。

6、離心： 短暫離心，去除氣泡。

7、上機(jī)運(yùn)行： 將反應(yīng)板放入QuantStudio 1儀器中，設(shè)置好反應(yīng)程序（退火、延伸溫度和時(shí)間等）和熒光檢測(cè)通道，開始運(yùn)行。

8、數(shù)據(jù)分析： 運(yùn)行結(jié)束后，使用配套的QuantStudio Design & Analysis Software軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析（Ct值計(jì)算、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作等）。